| Abstract |
단일 탄소원과 질소원 및 에너지원으로 aniline을 이용하는 Delftia sp. JK-2에서 분리 정제한 catechol 2,3-dioxygenase (C2,3O)의 특성과 N-말단 아미노산 및 DNA 서열을 분석하였다. C2,3O의 특성을 조사하기 위하여 aniline에서 배양한 Delftia sp. JK-2를 초음파 분쇄기로 파쇄하였으며, ammonium sulfate precipitation과 DEAE-sepharose로 정제하였다. 정제된 C2,3O의 고유활성(specific activity)은 약 4.72 unit/mg이었으며, C2,3O는 catechol 과 4-methylcatechol에 대해서 효소활성을 나타내었다. C2,3O는 30oC와 pH 8.0에서 최적 활성을 나타내는 것으로 조사되었으며, Ag+, Hg+, 그리고 Cu2+는 Delftia sp. JK-2의 C2,3O 활성을 억제하였다. SDS-PAGE에 의해 측정된 C2,3O의 분자량은 약 35 kDa이었으며, N-말단 아미노산 서열을 분석한 결과, 1MGVMRIG-HASLKVMDMDA-AVRHYENV26로 확인되었다. 이 N-말단 아미노산 서열은 Pseudomonas sp. AW-2와 Coma-monas sp. JS765의 C2,3O와 일치하는 것으로 나타났으며, 얻어진 결과를 토대로 primer를 제작하여 polymerase chain reaction (PCR)을 실시하였다. PCR을 통해 얻어진 Delftia sp. JK-2의 C2,3O 유전자 DNA 서열을 분석하여 상동성 조사를 하였다. DNA 서열의 상동성 조사는 유추되는 아미노산 서열로 바꾸어서 실시하였으며, 그 결과 Delftia JK-2의 C2,3O는 Pseudomonas sp. AW-2의 C2,3O(100%)와 Comamonas sp. JS765의 C2,3O(97%)에서 높은 상동성이 확인 되었다. |
