| Title | DNA shuffling을 이용한 Alcaligenes faecalis T1의 PHB depolymerase 활성 증진 | ||
| Author | 신동성· 남진식· 이영하 * | ||
| Address | 충남대학교 자연과학대학 미생물학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 39(2),76-82, 2003 | ||
| DOI | |||
| Key Words | Alcaligenes faecalis T1, DNA shuffling, PHB depolymerase, poly(3-hydroxyalkanoate) | ||
| Abstract | Alcaligenes faecalis T1의 poly(3-hydroxybutyrate)(PHB) depolymerase 활성 증진을 위해 DNA shuffling 방법을 이 용하였다. 제조된 A. faecalis T1의 PHB depolymerase 돌연변이 유전자의 library를 Pseudomonas syringae의 ice nucleation protein 유전자를 포함하는 발현벡터 pJHC11에 클로닝하여 약 7,000개의 형질전환체를 얻었다. 탄소 원으로 PHB 또는 poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate)를 포함하는 M9 최소배지를 이용하여 형질전환 체들로부터 활성이 서로 다른 돌연변이주들을 선별하였다. 이들의 PHB depolymease 활성은 평판배지에서의 halo 형성 및 배양 상등액을 이용한 탁도 감소 실험으로 확인하였으며, 형질전환체들 중에서 shuffling 전의 대조 군에 비하여 사용된 기질에 따라 효소활성이 1.8-3.2배 증진된 II-4 돌연변이주를 얻었다. DNA 염기서열의 분석 을 통하여 II-4의 PHB depolymease에는 3개의 아미노산 치환(Ala209Val, Leu258Phe, Asp263Thr)이 이루어졌음 을 확인하였다. 여러 가지 돌연변이주의 아미노산 서열의 변화를 분석한 결과, PHB depolymerase의 catalytic triad 주위에 기존 아미노산에 비하여 보다 소수성인 아미노산으로의 치환이 소수성 기질인 PHB에 대한 분해 활 성 증진에 기여하는 것으로 추정되었다. | ||
| Download PDF | [2]39(2).pdf | ||