| Title | 기존의 핵산증폭기를 사용한유리슬라이드상에서의 원위치 중합효소 연쇄반응 | ||
| Author | 오정균 1 · 장진수 2 · 이재영 * | ||
| Address | 1 성균관대학교 생명과학과; 2 목암연구소목포대학교 생물학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 39(3),197-200, 2003 | ||
| DOI | |||
| Key Words | heat conductivity, high molecular weight products, in situ PCR, temperature-time profile | ||
| Abstract | 기존의 핵산증폭기를 사용하여 유리 슬라이드상에서의 효과적인 원위치 중합효소 연쇄반응(in situ PCR)을 수 행하기 위해서는 여러 가지 조건들을 고려해야 하는데, 이러한 조건에는 PCR 용액의 세포속으로의 침투, 증폭 된 PCR 산물의 세포외 유출의 방지, PCR 용액 성분의 유리슬라이드로의 비특이적 부착으로 인한 손실, 열에 의 한 시약의 증발, heat block으로부터 슬라이드로의 열전도성 등이 있다. 특히 PCR 용액 성분의 세포내로의 침투 를 보장하기 위해서는 다소 높은 농도의 PCR 용액성분(특히 4.5mM MgCl_2 농도)이 필요하였고, Taq 효소는 PCR 전 처리(pre-PCR incubation)를 수행하는 경우, 50ml 반응당 5~10units이면 충분하였다. 또한 PCR의 전형적 인 온도-시간 양상(temperature-time profile)을 만족시키기 위해서는 먼저 샘플의 건조화를 방지해야 하는데, 이 를 위해서 heat block 속의 빈 공간에 적당량의 물을 첨가했고, 설정온도와 실제온도를 측정해본 결과 약 3~4℃의 차이가 있었다. | ||
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