| Title | Moraxella sp. CK-1의 세포외 Autolysin의 분리 정제 및 활성도 측정 | ||
| Author | 오영상 · 이장현 1 · 한명수 2 · 윤문영 * | ||
| Address | 한양대학교 화학과 ; 1평택대학교 교양학부 ; 2한양대학교 생명과학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 39(3),148-154, 2003 | ||
| DOI | |||
| Key Words | Anabaena cylindrica, Extracellular autolysin, Moraxella sp. CK-1 | ||
| Abstract | Moraxella sp. CK-1는 남조류 Anabaena cylindrica의 생장을 억제한다고 알려져 있다. Moraxella sp. CK-1의 세포 외 autolysin의 분리는 다음과 같은 방법으로 분리를 시도하였다. 흡광도 660nm에서 0.7~0.8이 되도록 BGC-11 세 포배양액에서 키우고, 원심분리로 균주인 Moraxella sp. CK-1를 제거한 뒤 세포배양액을 Amicon ultrafiltration으 로 농축을 하였다. 농축한 세포배양액을 (NH4)2SO4로 0~20%, 20~40%, 40~60%, 60~80%로 분획하여 단백질을 14,000g로 침전 시켰다. 침전된 단백질을 20mM Tris-HCl, pH 8.0 완충용액으로 현탁시킨 뒤, 동일 완충용액을 이용하여 투석을 하였다. (NH4)2SO4로 분획한 뒤 활성확인을 위해 Anabaena cylindrica가 도포된 평판배지에서 활성을 확인한 결과, 40~60%, 60~80%에서 활성이 있음을 확인하였다. 이들을 각각 Mono-QTM HR 5/5 (column volume 1ml) column을 이용하여 FPLC에서 단백질을 분리하였다. (NH_4)_2SO_4로 분획한 40~60%에서는 major peak 3개, 60~80% 분획에서는 2개의 major peak가 분리되었다. Mono-QTM HR 5/5 column에서 분리되어 나온 major peak 5개를 투석한 뒤 Anabaena cylindrica lawn에서 활성을 확인하였으나 확인이 되지 않았다. PVDF membrane을 이용하여 transfer하여 40~60% 침전에서 17kDa의 단백질을 얻어냈다. 이를 N-terminal amino acid sequence를 하여 serine protease의 계열임을 확인하였다. | ||
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