| Title | Transformation-associated recombination cloning에 의한유전자 분리에 사용되는 target hook에 대한 GC content의 영향 | ||
| Author | 김중현 · 신영선 · 윤영호 · 장형진 · 김은아 · 김광섭 · 정정남 · 박인호 · 임선희 · 선우양일 * | ||
| Address | 동아대학교 자연과학대학 생물학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 39(3),128-134, 2003 | ||
| DOI | |||
| Key Words | Saccaromyces cerevisiae, Transformation-associated recombination (TAR) cloning, Yeast Artificial Chromosome (YAC) | ||
| Abstract | Transformation-associated recombination (TAR) 클로닝법은 목적 유전자를 포함한 게놈 DNA와 그 유전자의 5' 또는 3' 말단 서열을 포함하고 있는 선형의 TAR vector를 동시에 출아효모의 spheroplast내로 co-penetration 시켜 상동부위에서 일어나는 재조합에 의해 환형의 Yeast Artificial Chromosome (YAC)으로 분리되는 방법이다. 일반 적으로 TAR 클로닝법에 의한 목적의 single-copy 유전자 분리 빈도는 전체 형질전환체의 0.01~1％ 정도이다. 이 러한 TAR 클로닝법을 개선하기 위하여 Tg·AC transgenic mouse를 모델계로 사용하여 유전자 분리에 대한 target hook 내의 GC content가 미치는 영향을 조사하였다. 이러한 목적으로 한쪽에는 다양한 GC content (18~45%)를 지닌 transgene 특이적 hook을 포함하고 다른 한쪽은 B1 반복서열을 가지는 radial TAR vector를 사 용하여 transgene 분리 빈도를 측정하였다. 그 결과 target hook의 GC content는 23% 이하의 경우, ~40%인 경우 에 비해 두 배 정도 클로닝 빈도가 감소하였다. 따라서 TAR vector를 제작할 때, 유전자 분리에 이용되는 target hook의 GC content는 약 40% 일 때 가장 적정한 것으로 나타났다. 또한 높은 target hook 내의 GC content (65%) 위치 분포에 의한 차이는 클로닝 빈도에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. | ||
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