| Title | 원위치 중합효소 연쇄반응에서 증폭산물의 세포내 보존을 위한 방법들 | ||
| Author | 이재영 * | ||
| Address | 목포대학교 자연과학대학 생물학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 37(4),294-298, 2001 | ||
| DOI | |||
| Key Words | biotinylated dUTP, high mollecular weight profucts, In situ PCR, tailed primers | ||
| Abstract | 중합효소반응(PCR)은 그 뛰어난 효능에도 불구하고 목표핵산의 오염으로 인하여 종종 가양성반응을 일으키는데, 이를 해결할 수 있는 원위치중합효소반등(in situ PCR)이 개발되었다. 이 기술은 조직절편, 현탁배양세포등에 다양하게 쓰이는데 그 목표핵산이 위치하는 곳에서 증폭을 하여 다양한 종류의 세포들이 모인 곳에서 원하는 목표핵산을 가진 세포만을 탐지할 수 있게 한다. 세포내에서 핵산표적물을 증촉시키키 위해서는 필요한 반응물질들이 세포내부로 들어갈 수 있도록 세포막이 투과성을 높여주어야 하는데, 이를 위한 처리는 반응물질들의 세포내로의 유입을 용이하게 할 뿐만 아니라 또한 증폭산물의 세포외부로의 유출을 가능케 한다. 따라서 세포밖 유출을 감소시키기 위한 방법으로서 증폭산물의 크기를 증가시킬 수 잇는 두가지 방법을 사용하였다. HIV-1으로 감염기킨 Molt/LAV와 U1.1의 현탁배양세포들을 PCR tube안에서 기존의 primer를 변형시킨 tailed primer와 dTTp대신 biotinylated dUTP로 증폭시켰을 때, 각각 길이가 긴 증폭산물과 부피가 큰 증폭산물을 만들게 되었다. | ||
| Download PDF | Kor_370410_294-298p.pdf | ||