| Abstract |
Streptomyces coelicolor(Muller)로부터 catalase 유전자를 클로닝하기 위하여 진핵생물과 몇몇 원핵생물의 전형적인 catalase(monofunctional catalase)들 사이에 보존된 부의를 이용하여 PCR primer를 제조하였다. 게놈 DNA를 PCR로 증폭한 결과, catalase 유전자로부터 유래할 수 있는 276bp의 절편이 관찰되었다. 이를 클로닝한 뒤 염기서열을 분석하였다. 염기서열로부터 유추된 아미노산 서열의 상동성 검색 결과, 전형적인 catalase의 유전자로부터 유래한 것임이 확인되었으며, 이를 탐침으로 S. coelicolor의 파아지 λ genomic DNA library를 screening하였다. 그 결과 4.5kb의 삽입체를 가지는 한 개의 클론을 얻었으며, PCR 산물과 hybridization하는 부위를 중심으로 부분적인 염기서열을 결정하였다. 이 클론은 PCR산물과 동일한 염기서열을 가지고 있었으며, 전형적인 catalase의 ORF를 전부 가지고 있는 것으로 추정된다. 이 catalase 유전자를 catA로 명명하였다. PCR 산물을 탐침으로 게놈 DNA의 Southern hybridization을 약간 낮은 stringency에서 수행하면, 2~4개의 절편이 검출되는데, 이 중, SalI으로 절단된 약 5.8kb의 절편을 colony hybridixation에 의해 클로닝하였다. 부분적인 염기서열 분석 결과, 이 절편도 전형적인 catalase들과 높은 상동성을 보였으며, catA와는 전혀 다른 염기서열을 가지는 또 다른 종류의 catalase 유전자임을 알 수 있었다. 이 유전자를 catB라 명명하였다. 본 결과는 S. coelicolor에 여러 가지 catalase가 존재하며, 이들의 발현 양상이 환경에 따라 변화한다는 보고와 부합되며, catalase 유전자들의 발현이 어떻게 조절되는지를 밝힐 수 있는 기반을 마련하게 되었다. |
