| Title | Flavimonas oyrzihabitans KU21의 원형질체 생성, 재생 및 융합 | ||
| Author | 이수연 · 임영복 · 박용근 · 이영록 * | ||
| Address | 고려대학교 이과대학 생물학과; 서울대학교 분자미생물학 연구센터 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 31(4),318-325, 1993 | ||
| DOI | |||
| Key Words | Flavimonas oryzihabitans, spheroplast, regeneration, fusion | ||
| Abstract | 아닐린 분해균주 Flavimonas oryzihabitans KU21 의 원형질체 생성, 재생, 그리고 융합 등의 최적 조건을 조사하였다. 세포를 37℃ 로 prewarming 시킨 0.2 M Tris-Hcl(pH8.0) 완충액으로 현탁시킨 후 0.5% 이상 원형질체로 전환되었으며, 이때 효소처리는 37℃ 에서 진탕하지 않고 처리했을 때가 가장 효과적이었다. MgCl_2 와 CaCl_2 수용액은 원형질체의 안정성을 높였고 완충액에 0.8% BSA 를 첨가함으로써 상온에서 4시간 까지 원형질체의 생존력을 80% 까지 유지할 수 있었다. 원형질체의 재생은 overlaying 방법이 가장 효과적이어서 3.8% 의 재생을 보였다. Rich regeneration medium 에 20 mM CaCl_2 를 첨가하였을 때 재생율이 약 3.5배 증가하였고 완충액에 0.8% BSA 를 첨가했을 때는 4.5배의 증가율을 나타내었다. 삼투안정제로 0.5 M sucrose 를 첨가한 rich regeneration medium 에서 F. oryzihabitans 의 원형질체는 top plating 하여 6시나 이후부터 재생되기 시작하여 11 시간까지 80% 의 재생이 이루어졌다. 융합원으로 40% PEG6000 과 CaCl_2 를 사용하여 F, oryzihabitans 의 종내 원형질체 융합을 유도하였을때 recombinants 의 생성율은 2.0 × 10^5 ~ 3.6 × 10^5 이었으며 recombinants 들은 여러 세대 후에도 분리되지 않고 안정하였다. | ||
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