| Title | 사람의 O-linked-N-acetyl-b-D-glucosaminidase 유전자를 함유한 대장균의 배양조건과 효소학적 특성 | ||
| Author | 강대욱 * · 조용권 · 서현효 1 | ||
| Address | 창원대학교 보건ㆍ생화학과;1 진주 산업대학교 환경공학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 40(2),147-153, 2004 | ||
| DOI | |||
| Key Words | O-GlcNAcase, induction, optimal pH, optimal temperature, reaction time, Western blot | ||
| Abstract | 단백질의 serine이나 threonine의 수산기에 N-acetyl-[beta]-D-glucosamine (O-GlcNAc)으로 변형되는 당쇄는 대부분의 진핵세포에서 광범위하게 일어나는 번역 후 수식의 일종으로 여러 세포 내 현상에 관여하고 있다. O-GlcNAc의 변형정도는 O-GlcNAc transfearse (OGT)와 O-linked N-acetyl-[beta]-D-glucosaminidase (O-GlcNAcase)에 의해 조절된다. O-GlcNAcase의 효소활성 조절물질을 탐색하기 위한 시험관 내 검정계를 확립하기 위해 재조합 O-GlcNAcase의 생산을 시도하였다. O-GlcNAcase 발현을 최적화하기 위한 배양조건을 검토한 결과 유도 배양온도 30^oC, 유도제인 L-arabinose 0.02%, 유도 배양시간 5시간 등으로 나타났다. 위의 조건에서 대장균 형질전환체를 배양하면서 한 시간 간격으로 배양액을 채취하여 세포를 파괴하고 얻은 효소용액의 활성은 배양 후 3시간에서 5시간까지는 급격히 증가하였으나 그 이후는 거의 증가하지 않았다. Western blot으로 발현된 단백질 양을 조사한 결과는 활성 그래프와 비슷한 양상을 보였다. 이렇게 생산한 O-GlcNAcase의 최적 반응조건은 pH 6.5, 반응온도 45^oC, 기질의 농도 2 mM, pH 6.5로 나타났다. | ||
| Download PDF | 40(2)-11(147-153).pdf | ||