| Title | 혈장분획제제 제조공정에서 크로마토그래피 세척 검증을 위한모델바이러스로서의 Porcine Parvovirus 정량 | ||
| Author | 길태건, 김원중, 이동혁, 강용1, 성학모1, 유시형2, 박순희2, and 김인섭* | ||
| Address | 한남대학교 이과대학 생명과학과, 1(주)녹십자 종합연구소, 2식품의약품안전청 혈액제제과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 41(3),216-224, 2005 | ||
| DOI | |||
| Key Words | cleaning validation, plasma derivatives, porcine parvovirus, real-time PCR, virus inactivation | ||
| Abstract | 혈장분획제제 중 혈액응고인자제제와 일부 면역글로불린제제는 혈장에 존재하는 다양한 단백질로부터 유효한 단백성분만을 선택적으로 분리 정제하기 위해 크로마토그래피 방법을 사용하여 생산된다. 효율적인 세척(cleaning) 공정이 이루어지지 않는다면 크로마토그래피는 다양한 종류의 불순물뿐만 아니라 혈액 중 내재 또는 오염 가능성이 있는 위해인자가 오염될 가능성이 있다. 본 연구에서는 혈장분획제제 제조공정에 사용되는 크로마토그래피의 세척 공정에서 혈장유래 바이러스의 제거 및 불활화 공정의 검토 강화로 혈장분획제제의 안전성을 확보하기 위해 크로마토그래피 세척 검증 시스템을 구축하고자 하였다. 크로마토그래피 세척 공정 중 바이러스 제거 검증을 위해 혈장유래 바이러스 중 물리·화학적 처리에 가장 큰 저항성을 갖는 human parvovirus B19의 모델 바이러스인 porcine parvovirus(PPV)를 대상으로 real-time PCR 정량법을 확립하였다. PPV에 특이적인 primer를 선별하였으며 형광염료 SYBR Green I을 사용하여 PPV DNA를 정량하였다. 세포배양법에 의한 감염역가와 비교한 결과 PCR 민감도는 1.5 TCID_50/ml이었다. 확립된 검증법의 신뢰성(reliability)을 보증하기 위해 실험법의 특이성(specificity), 재현성(reproducibility) 등을 검증하였다. 구축된 검증시스템을 thrombin 분리·정제를 위한 SP-Sepharose 양이온 크로마토그래피 공정과 factor VIII 분리·정제를 위한 Q-Sepharose 음이온 크로마토그래피 공정에 적용하여 크로마토그래피 세척 검증을 실시하고, 세척 검증 시스템의 적합성을 확인하였다. <br> | ||
| Download PDF | 41(3)-11(p.216-224).pdf | ||