| Title | 갯벌 퇴적물내 병원성 Vibrio vulnificus의 신속하고 특이적인 검출 | ||
| Author | 변기득1, 이정현*, 이계준1, and 김상진 | ||
| Address | 1서울대학교 생명과학부, 한국해양연구원 해양생명공학센터 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 41(3),168-176, 2005 | ||
| DOI | |||
| Key Words | real-time TaqMan PCR, tidal flat sediment, Vibrio vulnificus | ||
| Abstract | 갯벌 퇴적물에 존재하는 병원성 해양미생물인 Vibrio vulnificus를 신속하고 정확하게 검출하기 위해 PCR, Southern hybridization 방법과 real-time PCR을 수행하여 검출 민감도를 비교하였다. 갯벌 퇴적물로부터 bead beater를 이용한 물리적 방법으로 DNA 조추출액을 얻고 상용화된 키트 (Geneclean turbo Kit)를 이용하여 부식물질(humic substances)을 제거하였다. 병원성에 관련된 3 종의 유전자(hemolysin, vvhA; phosphomannomutase, pmm; metalloprotease, vvpE)를 대상으로 설계한 프라이머 셋을 동시에 사용하는 multiplex PCR 방법과 Southern hybridization과 병행한 방법(PCR/Southern hybridization)을 수행하였다. Real-time PCR은 hemolysin 유전자(vvhA)에 특이한 프라이머와 TaqMan 탐침을 사용하였다. 전처리하지 않은 갯벌 퇴적물의 경우, PCR/Southern hybridization과 real-time PCR 방법의 검출 민감도는 퇴적물 1 g 당 약 10^2 개의 세포 수준이었다. 농후처리액(APW; alkaline peptone water)으로 35oC에서 2~3시간, 8시간 증균 배양할 경우 갯벌 퇴적물 1 g당 2~10개 세포가 존재할때 PCR/Southern hybridization 방법과 real-time PCR 방법으로 각각 검출할 수 있었다. 전처리 과정을 포함하여 real-time PCR은 6~7시간, PCR/Southern hybridization은 약 36시간이 소요되었다. | ||
| Download PDF | 41(3)-5(p.168-176).pdf | ||