| Title | Target DNA 염기서열 내에 존재하는 비상동성 간격이 상동성재조합을 이용한 클로닝 빈도에 미치는 영향 | ||
| Author | 김재우1, 도은주, 윤세련, 정윤희, 윤영호, 임선희, 선우양일, and 박인호* | ||
| Address | 동아대학교 자연과학대학 생물학과, 1동아대학교병원 임상병리실 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 41(4),239-245, 2005 | ||
| DOI | |||
| Key Words | homologous recombination, orthologue isolation, Saccharomyces cerevisiae, transformationassociated recombination (TAR) cloning | ||
| Abstract | Transformation-associated recombination (TAR) 클로닝 법은 복잡한 게놈으로부터 염색체 내의 특정부위나 유전자를 선택적으로 분리할 수 있다. 이 방법은 목적 유전자에 근접한 작은 게놈 DNA 염기서열 정보를 필요로 한다. 이 기술은 효모의 spheroplast transformation을 시키는 동안 목적으로 하는 유전자의 5'' 또는 3'' 서열을 포함하고 있는 TAR vector와 게놈 DNA 사이에서 일어나는 상동성재조합에 의해 이루어진다. 본 연구에서는 plasmid 모델시스템을 이용하여 target hooks 내에 존재하는 비상동성 염기서열이 상동성재조합에 미치는 영향을 조사하였다. plasmid에 존재하는 HIS3 유전자와 변형시킨 his3-TRP1-his3 단편 사이의 상동성재조합의 효율은 Ura+ 형질전환체의 형질분석에 의해 이루어졌다. Ura+ 형질전환체의 수는 7 종류의 서로 달리 변형된 his3-TRP1-his3 단편들을 사용하였을 때 거의 동일하게 나타났다. 그러나 Trp+His+ positive recombinants의 빈도는 변형된 his3-TRP1-his3 단편 내에 비상동성 영역에 부정확한 간격을 지닐 때 현저한 감소를 나타내었다. 이러한 결과로서, 부정확한 간격이 target hook과 substrate DNA 사이에 일어나는 상동성재조합을 방해하는 것으로 사료된다. 그러므로 이종간의 상동 유전자를 클로닝 할 때에는 target hook 내의 비상동성 염기서열이 존재한다면 이것이 정확한 간격을 지니는지 여부를 중요한 요인으로 고려해야 한다. | ||
| Download PDF | 41(4)-2(p.239-245).pdf | ||