Title Quick Real-time PCR을 이용한 Avian Influenza Virus Subtype H5N1의 신속검출법
Author 김을환1, 이동우1, 한상훈1, 권순환2, and 윤병수1*
Address 1경기대학교 이과대학 생명과학과 분자생물학연구실, 2아주대학교 의과대학 만성염증질환센타
Bibliography Korean Journal of Microbiology, 43(1),23-30, 2007
DOI
Key Words avian influenza, detection, hemagglutinin, H5N1, Real-time PCR
Abstract 조류 인플루엔자 바이러스(AIV) H5N1 아형을 Real-time PCR법을 이용하여 가장 빠르게 진단할 수 있는 방법을 개발하였다. 검색 대상의 염기서열은 AIV H5N1 아형의 hemagglutinin 유전자 중 가장 상동성이 높은 387 bp의 부위를 선택하였고, 실험의 안전을 위하여 인공합성의 방법으로 제작하였다. Microchip을 기반으로 한 Real-time PCR법을 사용하였으며, 총 PCR 반응액의 양을 1 μl로, PCR 과정 중 각 단계, 즉 해리, 접합, 신장의 시간을 각 1초, 1초, 3초로 하여 총 실험시간을 단축하였다. 진단을 위한 실험과정에서 PCR 및 융점분석에 소요된 최단 시간은 12분 28초였으며, 민감도측정에서 최소 2.4개의 hemaggutinin 유전자를 기질로 하여 목적한 특이 189 bp의 PCR 산물을 증폭할 수 있었기에, 본 연구에서는 이런 초고속 PCR 실험방식을 Quick Real-time PCR이라 명명하였다. 이 결과들은 가금류 및 사람에게 전파된 AIV H5N1아형의 진단에 적용될 수 있을 뿐 아니라, PCR이 사용되는 다른 신속검색법에도 널리 적용 될 수 있을 것으로 기대한다.
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