| Title | Haemophilus influenzae의 Acetohydroxyacid Synthase Catalytic Subunit 재조합 단백질 발현 및 특성 | ||
| Author | 노경미1, 최경재1, 박준식2, and 윤문영1* | ||
| Address | 1한양대학교 자연과학대학 화학과, 2전자부품연구원 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 43(1),19-22, 2007 | ||
| DOI | |||
| Key Words | acetohydroxyacid synthase, characterization, Haemophilus influenzae, purification | ||
| Abstract | Acetohydroxylacid synthase (E.C. 2.2.1.6., AHAS)는 박테리아, 곰팡이, 식물 등에서 필수 아미노산 중 세 가지 아미노산(Val, Leu, Ile)의 생합성에 관여하는 효소 중 하나이다. Haemophilus influenzae에 대한 AHAS의 효소 특성을 규명하기 위하여 H. influenzae의 AHAS catalytic subunit 유전자(TIGR access code HI2585)를 pET28a 발현 벡터에 삽입시켰고, 대장균 BL21(DE3)에서 C-말단에 일련의 histidine을 갖는 재조합 단백질로 발현시켰고, Histidine-tag affinity chromatography 및 gel filtration chromatography를 이용하여 단일 단백질로 정제하였다. 정제하여 얻은 단백질은 최대 15 mg/ml까지 농축이 가능하였다. 정제된 단백질의 분자량은 SDS-PAGE 전기 영동법을 이용하여 약 63.9 kDa의 분자량을 확인하였다. AHAS 효소 활성은 discontinuous colorimetric assay 방법을 이용하여 측정하였다. H. influenzae AHAS catalytic subunit의 specific activity는 3.22 U/mg 이었다. 또한 AHAS의 최적 활성 온도와 pH는 각각 37oC와 pH 7.5이었다. AHAS 효소 활성은 buffer의 종류에 따라 차이가 있었으며, 유기용매가 증가함에 따라 효소 활성도 감소하였다. | ||
| Download PDF | 43(1)-04(p.19-22).pdf | ||