| Title | Nested PCR과 DNA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay를 이용한 Ralstonia solanacearum의 검출 | ||
| Author | 고영진1 and 조홍범2* | ||
| Address | 1다이아프로브(주) 진단사업부, 2서경대학교 생물공학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 43(3),179-185, 2007 | ||
| DOI | |||
| Key Words | DNA enzyme immunoassay, Ralstonia solanacearum | ||
| Abstract | 본 연구는 polymerase chain reaction (PCR) 기법과 DNA enzyme-linked immunosorbent assay (DNA ELISA) 기법을 이용하여 토양내 식물병원균인 Ralstonia solanacearum를 검출하고자 하였다. 토양 시료로부터 분석에 사용될 R. solanacearum DNA를 추출하기 위하여 몇 가지 방법을 비교 평가한 결과 기존의 DNA 추출 방법에 비하여 Guanidin isothiocyanate와 Chelex-100 resin을 사용하는 방법이 토양 내에 존재하는 다양한 종류의 반응 저해 물질과 R. solanacearum 만의 고유한 PCR 반응 저해물질들을 제거하는데에 효과적이었다. R. solanacearum만을 특이적으로 검출하기 위해 fliC 유전자 부위에 특이적인 몇 종의 primer들을 제작하였다. 이들 중 높은 민감도와 특이도를 나타내는 두 set의 primer RsolfliC (forward; 5-GAACGCCAACGGTGCGAACT-3 and reverse; 5-GGCGGCCTTCAGGGAGGTC-3, designed by J. Schönfeld et al.)와 RS_247 (forward; 5-GGCGGTCTGTCGGCRG-3 and reverse; 5-CGGTCGCGTTGGCAAC-3, designed by this study)를 선정하여 nested PCR을 수행할 수 있도록 고안하였다. Nested PCR primer에 biotin을 표지하였고 nested PCR 산물의 내부 서열과 특이적으로 교잡반응을 할 수 있는 probe를 제작하여 PCR 결과를 DNA-EIA 반응으로 확인 분석할 수 있도록 하였다. Primary PCR과 nested PCR의 산물을 전기영동 상에서 확인한 결과, nested PCR이 약 102 정도의 높은 민감도를 나타내었고 DNA-EIA의 경우 102~103 정도의 민감도를 상승시켜주는 것으로 확인되었다. | ||
| Download PDF | 43(3)-05(p.179-185).pdf | ||