| Title | 효모의 재조합 변이주를 이용한 인간 Centromeric Alphoid DNA Repeat의 안정성에 관한 연구 | ||
| Author | 김광섭, 신영선, 이상엽, 안은경, 도은주, 박인호, 임선희*, and 선우양일** | ||
| Address | 동아대학교 자연과학대학 생명과학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 43(4),243-249, 2007 | ||
| DOI | |||
| Key Words | alphoid DNA repeats array, homologous recombination, Saccharomyces cerevisiae, TAR cloning | ||
| Abstract | Centromere는 체세포분열과 생식세포분열 등 많은 주요 기능을 담당하는 고도로 분화된 구조이다. Alphoid DNA (α-satellite)는 인간뿐 아니라 모든 영장류의 염색체 내 centromere에서 발견되는 반복서열의 대부분을 차지한다. 인간 인공염색체(Human Artificial Chromosome, HAC)의 개발에서 가장 핵심적인 부분은 centromere의 분리 및 안정적인 유지에 있다. 이 영역은 출아효모에서 alphoid DNA 반복서열을 hook으로 이용하여 Transformationassociated recombination (TAR) cloning법을 사용하여 선택적으로 분리할 수 있다. 이러한 실험방법으로 먼저 repeat array를 rolling-circle amplication (RCA)를 통하여 약 5 kb까지 길이를 연장시킨 후, 효모 내에서 상동성재조합을 이용한 TAR cloning법을 사용하여 분리할 수 있다. 이렇게 분리된 35 kb~50 kb 길이의 4종류의 centromeric DNA repeat arrays (2, 4, 5, 6 mer)를 사용하여, 반복서열의 안정성 유지를 조사하기 위해 상동성재조합 변이주인 rad51, rad52, rad54를 사용하여 비교 분석하였다. 야생주, rad51과 rad54 변이주를 이용하여 형질전환을 수행한 결과, 반복서열의 크기에 있어서 많은 변화를 나타내었다. 반면, rad52 변이주는 야생주와 다르게 형질전환빈도가 매우 낮은 비율로 나타났으나, centromeric DNA repeat array의 안정성은 3배 이상으로 높게 나타냈다. 이러한 결과들을 미루어, rad52 변이주를 사용하여 centromeric DNA repeat arrays의 형질전환 실험에서 발생하는 많은 변이를 줄일 수 있을 것으로 보인다. 이러한 유전적 방법은 HAC 제작에서 반복서열의 유지에 훨씬 효율적으로 사용할 수 있을 것으로 사료된다. | ||
| Download PDF | 43(4)_02(p.243-249).pdf | ||