| Title | Prevotella nigrescens ATCC 33563T 균주-특이 중합효소연쇄반응 프라이머 개발 | ||
| Author | 송수근1, 유소영1, 김미광1, 김화숙2, 임선아2, 김도경3,4, 박재윤5, and 국중기1* | ||
| Address | 1조선대학교 치과대학 구강생화학교실, 2전남과학대학 치위생과, 3조선대학교 치과대학 구강생리학교실, 42단계 BK21 첨단치과의료연구인력양성사업단, 5조선대학교 의과대학 생화학·분자생물학교실 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 44(3),212-220, 2008 | ||
| DOI | |||
| Key Words | detection, DNA probe Pn10, PCR primer, Prevotella nigrescens ATCC 33563T | ||
| Abstract | 본 연구는 Prevotella nigrescens ATCC 33563T에 대한 균주 특이 DNA 프로브라고 보고된 Pn10 프로브의 균주 특이성을 한국인에서 분리된 P. nigrescens의 임상분리 균주를 이용하여 검증하고, P. nigrescens ATCC 33563T 균주 특이 PCR 프라이머를 개발하고자 시행되었다. P. nigrescens와 유전학적으로 가장 가까운 Prevotella intermedia를 포함한 구강 내 치주질환 원인균종인 5균종의 표준균주 및 참고균주, 그리고 P. nigrescens와 P. intermedia의 임상 분리 균주를 이용하여 Southern blot 분석법을 시행하였다. Southern blot 분석 결과 Pn10 DNA 프로브에 P. nigrescens ATCC 33563T 및 ChDC KB6 두 균주 지놈 DNA가 검출되었다. P. nigrescens KB6 균주에서 Pn10 DNA 프로브와 상동성이 있는 부위를 PCR법으로 증폭(KB6-Pn10)하여 클로닝한 다음 Pn10 DNA 프로브와 같이 핵산염기서열을 결정하여 상동성을 비교하였다. 그 결과 Pn10과 KB6-Pn10의 핵산염기서열간의 percent identity는 98.8%였으며, divergence는 0.6%였다. Pn10 DNA 프로브의 핵산염기서열을 바탕으로 두 종류 프라이머 쌍(Pn10-F-AC/ Pn10-R-AC 및 Pn10-F-A/ Pn10-R-A)을 설계 및 제작하여 P. nigrescens ATCC 33563T에 대한 균주 특이성을 PCR법으로 검증하였다. 이들 프라이머 쌍들의 민감도(sensitivity) 조사 결과, 이들은 P. nigrescens ATCC 33563T 지놈 DNA 4 pg까지 검출할 수 있음을 알았다. 이상의 연구 결과를 종합하면, Pn10 DNA 핵산염기서열을 바탕으로 설계된 Pn10-F-AC/ Pn10-R-AC 및 Pn10-F-A/ Pn10-R-A 프라이머 쌍들은 P. nigrescens ATCC 33563T를 신속 정확하게 검출하는 수 있어, 균주의 보존적 측면에서 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각된다. | ||
| Download PDF | 44(3)-07_p.212-220.pdf | ||