| Title | 대장균에서 비천연 아미노산의 위치특이적 삽입을 위한 Amber Suppressor tRNA와 Aminoacyl-tRNA Synthetase의 Amber Suppression 활성측정시스템 개발 | ||
| Author | 김경태, 박미영, and 박중찬* | ||
| Address | 한국외국대학교 자연과학대학 생명공학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 45(2),215-221, 2009 | ||
| DOI | |||
| Key Words | amber suppression, aminoacyl-tRNA synthetase, suppressor tRNA, unnatural amino acid | ||
| Abstract | 대장균에서 비천연 아미노산을 단백질 생합성시 특정 위치에 삽입하는 방법의 하나로 amber suppressor tRNA와 여기에 비천연 아미노산을 특이적으로 결합할 수 있는 변형된 aminoacyl-tRNA synthetase 쌍을 이용한다. 이러한 기술의 개발을 위해 필요한 여러 요소 중 하나는 이러한 시스템이 대장균에서 얼마나 잘 작동하는지를 확인할 수 있는 in vivo 보고시스템을 설정하는 것이다. 본 논문에서는 β-galactosidase 유전자의 N-말단에 amber 코돈을 삽입한 보고유전자를 제작하였으며, 이를 대장균(DH10B)의 chromosomal DNA에 삽입하여 DH10B(Tn:lacZam) 균주를 개발하였다. Genomic PCR과 Southern blot 분석을 통하여 lacZ amber 유전자가 대장균의 염색체에 삽입된 것을 확인하였으며, DH10B(Tn:lacZam)은 amber suppression을 유도할 수 있는 벡터가 형질 전환될 경우만 β-galactosidase 활성을 나타냈다. DH10B(Tn:lacZam)에 효모균의 amber suppressor tRNATyr와 Tyrosyl-tRNA synthetase 쌍을 동시에 발현하는 벡터를 형질전환하였을 때, amber suppression에 의해서 β-galactosidase 활성이 나타났다. 하지만 이 활성은 대장균의 amber suppressor tRNAGln를 발현하는 pSupE2를 형질전환하였을 때와 비교하여 매우 낮은 β-galactosidase 활성을 나타냈다. 이러한 결과는 DH10B(Tn:lacZam) 균주가 β-galactosidase 활성을 통하여 정성 및 정량적으로 in vivo amber suppression 활성을 비교 분석할 수 있는 특성을 가졌음을 나타낸다. | ||
| Download PDF | HM45(2)-18_p.215-221.pdf | ||