| Title | Escherichia coli에서 효소활성을 지닌 Human HtrA3 단백질 제조와 HtrA Serine Protease 1, 2와의 효소활성 비교 | ||
| Author | 김지환 , 김구영, 남민경 , 김상수, and 임향숙* | ||
| Address | 가톨릭대학교 생명의과학과, 분자유전학연구소 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 45(4),291-299, 2009 | ||
| DOI | |||
| Key Words | GST-fusion system, HtrA3, serine protease activity | ||
| Abstract | 본 연구에서는 Human HtrA3 (HtrA3)의 효소활성을 분자수준에서 연구하기 위해 HtrA간의 상동성과 기존에 알려진 maturation site들을 비교 분석하여 예상 mature HtrA3인 M1-HtrA3와 M2-HtrA3를 발현하는 construct를 제작하였다. pGEX system을 통해 Top10 균주에서 발현, 정제한 M1-HtrA3 단백질은 10 µg/L를 정제할 수 있었으며 발현량 대비 1%를 회수할 수 있었다. M2-HtrA3는 M1보다 5배 가량 많은 양을 정제할 수 있었으며 발현량 대비 회수율은 3배 정도 더 높았다. β-Casein을 이용한 in vitro cleavage test를 통해 M1, M2 form 모두 protease 활성을 갖는 것을 확인하였다. 또한, β-casein cleavage를 통해 HtrA serein protease들 간의 상대적인 활성을 비교한 결과, HtrA3와 HtrA2는 HtrA1보다 약 2배 더 높은 proteolytic cleavage 활성을 보였다. 본 연구에서 정립한 protease 활성을 지닌 HtrA3의 제작과 정제 조건은 HtrA3의 substrate를 탐색을 용이하게 할 수 있을 것이며, HtrA3 연관된 질환의 발병기전과 세포 신호전달을 이해하는 연구에 활용될 수 있을 것이다. | ||
| Download PDF | HM45(4)_01_p.291-299.pdf | ||