| Title | 인간 퓨린수용체 P2X4를 발현시킬 때 나타나는 대장균 독성의 원인분석 | ||
| Author | 유연주, 정윤아, and 임동빈* | ||
| Address | 숭실대학교 자연과학대학 의생명시스템학부 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 47(1),7-13, 2011 | ||
| DOI | |||
| Key Words | membrane protein, overexpression toxicity, protein expression and purification, purinergic receptor P2X | ||
| Abstract | 일반적으로 대장균을 숙주로 이용하여 고등생물 유래 막단백질을 발현시킬 경우 발현된 막단백질은 숙주 세포에 치명적인 독성을 보인다. 우리가 발현을 시도한 15개의 인간 막단백질 중에서 특히 퓨린수용체 P2X4 발현은 대장균에 강한 독성을 보였다. 이러한 독성의 원인을 알아보기 위해 hydroxylamine을 사용하여 하여 인간 P2X4 유전자를 돌연변이 시키고 독성이 약해진 돌연변이체를 선별하였다. 돌연변이체 단백질을 면역블랏으로 분석한 결과 야생형에 비해 모두 단백질의 크기가 작았다. 크기가 제법 큰 돌연변이 두 개를 골라 DNA 서열분석을 해보니 130번째, 또는 194번째 Trp 코돈이 종결 코돈으로 바뀜으로써 두 번째 막통과 도메인이 사라진 truncated protein이라는 사실을 알았다. 이들 돌연변이체의 세포내 위치를 추적해보니 둘 다 세포막에 삽입되어 있지는 않았다. 이런 결과를 종합해 볼 때 P2X4의 발현이 대장균에 독성을 보이기 위해서는 전체 단백질의 올바른 세포막 삽입이 중요함을 시사한다. | ||
| Download PDF | 47(1)_02_p.7-13.pdf | ||