| Title | 단보] Construction, Expression, and Purification of N-Terminal Variants of Lumazine Protein from Photobacterium leiognathi | ||
| Author | Kyoung-Suk Kang, So-Young Kim, Ji-Sun Choi, Young-Doo Kim, Robert Pokoo, Ki-Seok Nam, and Chan Yong Lee* | ||
| Address | Department of Biochemistry, Chungnam National University, Daejeon 305-764, Republic of Korea | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 49(2),205-210, 2013 | ||
| DOI | http://dx.doi.org/10.7845/kjm.2013.3022 | ||
| Key Words | Photobacterium, bioluminescence, lumazine protein, site directed mutagenesis | ||
| Abstract | 루마진 단백질은 발광 세균인 Photobacterium 종에서 추출된 형광성 단백질이다. 형광성을 지닌 최소 크기의 Photobacterium leiognathi 야생형 아미노-말단 도메인 루마진 단백질(N-terminal domain of lumazine protein 118 wt)과 여러 영역에 tryptophan을 생성시킨 돌연변이 단백질들(N-LumP 118 V41W, S48W, T50W, D64W, A66W)을 코드하는 유전자들을 위치 지정 돌연변이(Site Directed Mutagenesis)와 중합효소 연쇄 반응(Polymerase Chain Reaction)을 통해 제조하였다. 위의 유전자들이 포함된 재조합 플라스미드를 대장균에 형질 전환시켜 과발현시키는 최적의 조건을 찾았으며, 발현된 야생형 및 돌연변이 아미노-말단 영역 루마진 단백질을 6X-His tag system을 이용하여 정제 하였다. 흡광 및 형광 분광광도계를 이용한 실험 결과 이들 단백질들은 리간드인 6,7-dimethyl-8-ribityllumazine과 결합하여 형광성을 보유함을 보였다. 따라서 이들은 형광성을 지니게 되는 최소 크기의 루마진 단백질일 뿐만 아니라 형광성을 지닌 아미노산인 tryptophan이 여러 위치에 유일하게 존재함으로써 배향성 및 거리 등의 단백질의 구조 및 결합에 관한 심도 있는 연구에 탐침자로써 유용하게 활용 될 수 있을 것이다. | ||
| Download PDF | 49(2)_17_p.205-2100.pdf | ||