| Title | 이형 재조합한 먹물버섯 Coprinellus congregatus Chitinase 1 (Chi1)의 발현과 생화학적 특성 분석 | ||
| Author | 유예은 and 최형태* | ||
| Address | 강원대학교 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 49(4),309-312, 2013 | ||
| DOI | http://dx.doi.org/10.7845/kjm.2013.3081 | ||
| Key Words | chitinase, Coprinellus congregatus, enzyme characterization | ||
| Abstract | 진균류의 세포벽은 다양한 결합의 글루칸과 키틴질로 구성되었으며 이들의 생활사 전체에 해당하는 균사생장과 분화과정에서 키틴질 분해효소(chitinase)를 생성한다. 먹물버섯의 하나인Coprinellus congregatus는 전 생활사 동안 최소 2종 이상의chitinase를 생성한다. Chi1은 균사시기부터 버섯의 자가분해 시기까지 고르게 생성되며, chitinase 2는 버섯 자가분해 시기에 다량 생성된다. Chi1의 cDNA 유전자를 Pichia pastoris의 발현벡터의 하나인 pPICZB 벡터의 c-myc과 6x Histidine tag을 포함하는 Chi1 재조합 단백질 발현벡터를 구축하고 이를 발현시킨 후,Histidine tag에 의한 affinity chromatography 방법으로 Chi1 단백질을 정제하였다. 정제된 Chi1은 endochitinase의 기질인4-nitrophenyl N,N’,N’’-triacetyl-β-D-chitotrioside에 대하여 활성을 보였다. 이를 기질로 사용했을 때 최적 pH는 8.0이었고, 최적 온도는 35℃로 확인되었다. Km 값과 Vmax 값은 각각 0.780mM과 0.10 (OD min-1unit-1)로 나타났다. 이러한 생화학적 특성은버섯 자가분해 시기에 작용할 것으로 판단되는 Chi2가 exochitinase활성을 보이며, pH 4.0에서 최대 활성을 보이는 것을 종합하면상호 보완작용을 할 것이라고 판단된다. 정제된 Chi1은 Alternariaalternata, Fusarium graminearum 및 Trichoderma harzianum등과 같은 식물 병원성 균류에 처리한 결과 60 μg/ml 농도에서이들의 생장을 완전하게 억제하였다. | ||
| Download PDF | 49(4)_02_p.309-312.pdf | ||