| Title | Pichia pastoris에서 사람 락토페린 N-lobe의 발현과 항균활성 | ||
| Author | 원수진, 조재형, 김승환, 권혁진, and 이현환* | ||
| Address | 한국외국어대학교 생명공학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 51(3),271-279, 2015 | ||
| DOI | http://dx.doi.org/10.7845/kjm.2015.5043 | ||
| Key Words | Pichia pastoris, antibacterial activity, expression, human lactoferrin, N-lobe | ||
| Abstract | 락토페린(LF)는 철이온과 결합하는 당 단백질로서 항균, 항바이러스, 항진균 등의 기능을 가지고 있으며, 생체의 각종 체액으로부터 분비되는 다기능성 단백질이다. 본 연구에서는 사람의 락토페린(hLF)으로부터 유래된 N-lobe의 유전자를 분 리하고 산업용 균주로서 많이 사용되는 메탄올자화 효모인 Pichia pastoris에서 발현시켰다. 재조합 사람 락토페린 N-lobe (rhLF-N)는 배양액으로 분비 발현되었으며, 3L 발효조에서 약 458 μg/ml이 수준으로 생성되었다. rhLF-N을 정제한 다음 SDS-PAGE와 western blot으로 분석하여 분자량 35 kDa 단백 질을 확인하였으며, hLF에 대한 항체를 이용하여 면역확산법으로 면역성을 확인하였다. rhLF-N의 mRNA 발현양상을 qRT-PCR로 분석한 결과 메탄올 첨가에 의한 발현 유도 후 2-3 일째에 발현율이 가장 높았으며, 4일째에는 점차적으로 감소 하였다. 정제한 rhLF-N을 이용하여 항균활성을 조사한 결과 Staphylococcus aureus, E. coli, Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, Salmonella typhimurium과 같은 병원 성 균에 대해 광범위한 항균활성을 보였으나, LF유래 항균 peptide들과 항균활성을 비교하였을 때, 항균력이 상대적으로 매우 떨어지는 것으로 나타났다. 비록 본 연구에서 발현한 rhLF-N은 항균력은 떨어지나, hLF에 비해 그 크기가 작고 배 양조건 연구로 P. pastoris에서 대량 생산이 가능하며, 배양액 으로 분비시킬 수 있기 때문에 정제 비용 등을 고려 할 때 산업 적 응용에는 보다 유리할 것으로 사료된다. | ||
| Download PDF | 51(3)_11_p.271-279.pdf | ||