| Title | Coprinellus congregatus의 laccase 유전자 프로모터의 산성반응인자 분석 | ||
| Author | 김수연, Linh Nguyen, and 최형태* | ||
| Address | 강원대학교 생화학과 | ||
| Bibliography | Korean Journal of Microbiology, 52(3),249-253, 2016 | ||
| DOI | http://dx.doi.org/10.7845/kjm.2016.6032 | ||
| Key Words | Coprinellus congregatus, acid stress, laccase, promoter analysis | ||
| Abstract | 먹물버섯의 하나인 Coprinellus congregatus는 생활사 동 안 여러 종의 laccase 효소를 생성한다. 균사 끝 효소와 버섯시 원체 효소 및 sclerotium (균핵) 효소들은 모두 이 균의 분화와 관련되었다. 이핵체 균사를 산성 액체배지(pH 4.0–4.5)에 접 종하면 새로운 laccase가 합성되어 분비된다. 이 laccase 유전 자의 프로모터의 어느 부분이 산 충격의 신호에 관련된 단백 질이 결합하는가 분석하기 위하여 녹색형광단백질(green fluorescent protein, GFP) 유전자를 laccase 프로모터 2.0 kb 다 음에 연결하고, 이를 형질전환 벡터인 pBARGEM7-1에 삽입 함으로써 발현벡터를 구축하였다. 이 promoter-GFP 조합의 5′ -region부터 차례로 제거한 짧은 길이의 이 발현벡터를 먹물버 섯 교배형 a1균과 a2균에 형질전환 방법으로 도입시키고 phosphinothricin 저항성으로 형질전환체들을 선발하였다. 선 발된 형질전환체 a1 (a1TF)과 a2 (a2TF)를 서로 교배하여 동형 접합(homozygotic) 이핵체 형질전환체를 만들었다. 이들을 산성 액체배지에서 36시간 배양하고 균체를 모아 confocal microscope를 사용하여 형광을 분석하였다. Laccase 유전자 의 전체 프로모터(2.0 kb)를 가진 발현벡터(F0-GFP)를 도입한 동형접합 형질전환체에서는 형광을 보였으나, 그 보다 짧은 길이(1.29 kb 이하)의 프로모터를 가진 형질전환체에서는 형 광이 나타나지 않았다. 이 결과에 근거하여 먹물버섯의 산 충 격에 대한 신호를 받는 부위가 laccase 유전자 프로모터의 -2.0 kb ~ -1.29 kb 사이에 있을 것으로 추정한다. | ||
| Download PDF | 52(3)_02_p.249-253.pdf | ||